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    首頁 RNeasy_FFPE_Kit -FFPE樣本中提取

    RNeasy_FFPE_Kit -FFPE樣本中提取.pdf

    RNeasy_FFPE_Kit -FFPE樣本中提取

    小嘎
    2018-04-02 0人閱讀 舉報 0 0 暫無簡介

    簡介:本文檔為《RNeasy_FFPE_Kit -FFPE樣本中提取pdf》,可適用于醫藥衛生領域

    SampleAssayTechnologiesRNeasyFFPEKitFFPE樣本中提取總RNA李慧EmilyLi年月SampleAssayTechnologies溶液配置miRNeasyFFPEKitFFPE樣本中提取miRNA和RNA(年月)、DNaseIstocksolution請勿打開DNaseI管蓋用針頭吸microLRNasefreewater(mL管裝中提供)注射入DNaseI并正反倒置混勻溶液。切勿渦旋震蕩!視試驗習慣和計劃將配置好的DNaseIstocksolution分裝至大小合適的離心管或PCR管。保存于℃可保證效期個月??稍凇姹3中谥?。不可反復凍融。因此建議分裝后℃保存盡量一次用完如果不能一次用完請即保存于℃周內用完。、BufferRPE加mL乙醇()至BufferRPE中每次使用前都搖勻。加過乙醇后建議貼標簽注明。SampleAssayTechnologies去石蠟的方法miRNeasyFFPEKitFFPE樣本中提取miRNA和RNA(年月)、庚烷和甲醇:A加入microL庚烷渦旋震蕩s室溫孵育min(℃)B加入microL甲醇渦旋震蕩s,timesg(,rpm)離心minC小心用槍頭吸取上清吸取上清時不要碰到沉淀物并用小槍頭小心吸掉殘留的庚烷甲醇D開蓋將沉淀物暴露在室溫下空氣干燥minE加入microL或microL(切片數量大于時)BufferPKD渦旋混勻F加入microL蛋白酶K用槍頭溫和混勻(反復吸打)G℃下孵育min℃下孵育min(如果只有一個加熱模塊那么當℃孵育完成后取出樣本置于室溫待加熱模塊達到℃再進行下一步孵育確保孵育的時間時間過長或過短都回造成更多的RNA片段化和CT值偏低)SampleAssayTechnologies、二甲苯、二戊烯或CitriSolv(三選一)miRNeasyFFPEKitFFPE樣本中提取miRNA和RNA(年月)A加mL二甲苯、二戊烯或CitriSolv渦旋震蕩s全速離心minB小心用槍頭吸取上清吸取上清的時候不要碰到沉淀物C在沉淀中加入mL乙醇()渦旋混勻全速離心min(乙醇的作用是將樣本中的二甲苯去除)D小心用槍頭吸取上清吸取上清時不要碰到沉淀物并用小槍頭小心吸掉殘留的庚烷甲醇E開蓋在室溫下孵育(℃最高不要超過℃)min或者孵育至所有殘液揮發F加入microL或microL(切片數量大于時)BufferPKD渦旋混勻G加入microL蛋白酶K用槍頭溫和混勻(反復吸打)H℃下孵育min℃下孵育min(如果只有一個加熱模塊那么當℃孵育完成后取出樣本置于室溫待加熱模塊達到℃再進行下一步孵育確保孵育的時間時間過長或過短都回造成更多的RNA片段化和CT值偏低)SampleAssayTechnologies、meltingA加入microL或microL(切片數量大于時)BufferPKD渦旋混勻B℃加熱min渦旋震蕩s全速離心minC用槍頭刺穿石蠟層加入microL蛋白酶K用槍頭溫和混勻(反復吸取打出)D℃下孵育min℃下孵育min(如果只有一個加熱模塊那么當℃孵育完成后取出樣本置于室溫待加熱模塊達到℃再進行下一步孵育確保孵育的時間時間過長或過短都回造成更多的RNA片段化和CT值偏低)miRNeasyFFPEKitFFPE樣本中提取miRNA和RNA(年月)SampleAssayTechnologies從FFPE樣本中提取RNA從FFPE樣本中提取總RNA用手術刀削去石蠟層切成microm厚的片狀(如果樣本已經暴露在空氣中將頭層棄掉)立即將切片放置于mL或mL(樣本大于個切片時)離心管(自備)中并蓋緊蓋子。按照前面的去石蠟方法操作將無色的下相轉移到新的mL離心管中。冰上孵育min后,timesg(,rpm)離心min將上清轉移至一個新的離心管注意不要碰到沉淀物。加入約樣本體積的DNaseBoosterBuffer(約microL或microLmdash取決于樣本量)以及microL的DNaseIstocksolution。正反倒置離心管混勻液體。簡單離心以收集管壁上的殘液。室溫下孵育minmiRNeasyFFPEKitFFPE樣本中提取miRNA和RNA(年月)SampleAssayTechnologiesmiRNeasyFFPEKitFFPE樣本中提取miRNA和RNA(年月)加入microL或microL(樣本大于個切片時)BufferRBC徹底混合溶解產物加入microL或microL(樣本大于個切片時)乙醇()至樣本中用槍頭混勻立即進行下一步轉移microL的樣本(包括可能存在的沉淀)至RNeasyMinElutespincolumn上(將RNeasyMinElutespincolumn放置在mL的收集管里收集管試劑盒中已提供)。蓋上收集管的蓋子ge,timesg(ge,rpm)條件下離心s丟棄收集管中的收集液重復上面的步驟直到之前的樣本都處理完畢加入microLBufferRPE至RNeasyMinElutespincolumn。小心蓋上收集管的蓋子ge,timesg(ge,rpm)條件下離心s丟棄收集管中的收集液加入microLBufferRPE至RNeasyMinElutespincolumn。蓋上收集管的蓋子ge,timesg(ge,rpm)條件下離心min丟棄收集管將RNeasyMinElutespincolumn放在一個新的mL的收集管里打開蓋子全速離心min丟掉收集管將RNeasyMinElutespincolumn放在一個新的mL的收集管里直接加microLRNasefreewater至spincolumn的膜上小心蓋上蓋子全速離心min收集洗脫液。

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